保存在沙土管或冷凍管中的生產菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在恒溫恒濕培養(yǎng)箱中25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5～7天(或較長時間)。恒溫恒濕培養(yǎng)箱所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子，對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基。將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。

一次制得的孢子瓶可在生產上延續(xù)使用半年左右。放線菌孢子的培養(yǎng)基大多是采用豌豆浸出液、牛肉膏及無機鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴大的扁瓶孢子培養(yǎng)基中,于28～37℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)5～14天。

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